广州伟伯科技有限公司
您的位置:首页 > 新闻中心 > 液相色谱柱常见问题解决方案
新闻中心
液相色谱柱常见问题解决方案
2018.04.12   点击2461次

1、柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方,柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。

1.1 压力过高:

这是高效液相在使用中最常见的问题,指的是压力突然升高,一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时,我们应该分段进行检查。

(1) 首先断开真空泵的入口处,此时,PEEK管里充满液体,使PEEK管低于溶剂瓶,看液体是否自由滴下,如果,液体不滴或缓慢滴下,则是溶剂过滤头堵塞。

处理方法:

用30%的硝酸浸泡半个小时,在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下,溶剂过滤头正常,再检查;

(2) 打开Purge阀,使流动相不经过柱子,如果压力没有明显下降,则是过滤白头堵塞。

处理方法:

将过滤白头取出,用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100PSI(6.7Bar)以下,过滤白头正常,再检查;

(3) 把色谱柱出口端取下,如果压力不下降,则是柱子堵塞。

处理方法:

如果是缓冲盐堵塞,则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞,则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。

假如,按上面的方法长时间冲洗压力都不下降,则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上,用流动相冲洗柱子。这时,如果柱压仍不下降,只有换柱子入口筛板,但是,一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以,尽量少用。

1.2 压力过低

压力过低的现象一般是由于系统泄漏

处理方法:

寻找各个接口处,特别是色谱柱两端的接口,把泄漏的地方旋紧即可。当然,还有一个原因就是泵里进了空气,但此时表现的往往是压力不稳,忽高忽低,更严重一点会导致泵无法吸上液体。

处理方法:

打开Purge阀,用3~5mL/min的流速冲洗,如果不行,则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。

2、漂移问题主要包括基线漂移和保留时间漂移。

2.1 基线漂移

一般说来,机器刚起动时,基线容易漂移,大概要半个小时的平衡时间,如果,你用了缓冲溶液或缓冲盐,还有就是在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长,但是,如果你在实验过程中发现基线漂移,则你要考虑下面的原因:

① 紫外灯能量不足。

解决方法:

更换新的紫外灯;

② 柱温波动。

解决方法:

控制好柱子和流动相的温度,检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。

③ 流通池被污染或有气体。

解决方法:

用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(最好断开柱子)。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。

④ 流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。

解决方法:

检查流动相的组成,使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。

⑤ 样品中有强保留的物质(高K'值)以馒头峰样被洗脱出,从而,表现出一个逐步升高的基线。

解决方法:

使用保护柱,如有必要,在进样之间。在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。

⑥ 检测器没有设定在最大吸收波长处。

解决方法:

将波长调整至最大吸收波长处;

⑦ 流动相的pH值没有调节好。

解决方法:

加适量的酸或碱调至最佳pH值;

2.2 保留时间漂移

保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志,同一种东西,两次的保留时间相差不要超过15s,超过了半分钟可看做保留时间漂移,就无法进行定性,你要考虑以下原因:

① 温控不当。

解决方法:

调好柱温,检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。

② 流动相比例变化。

解决方法:

检查四元泵的比例阀是否有故障。

③ 色谱柱没有平衡。

解决方法:

在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。

④ 流速变化。

解决方法:

重新设定流速。

⑤ 泵中有气泡。

解决方法:

从泵中除去气泡。

2.3 峰型异常问题

峰型问题是液相的主要问题,在做液相过程中,我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型,对于各种各样的异常峰,要区别对待,从主要问题出发,一个一个加以解决。

① 所有峰均为宽峰。

解决方法:

系统未达到平衡;

溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;

色谱柱尺寸及类型选择不正确;

色谱柱或保护柱被污染或柱效降低;

温度变化造成的影响。

② 所出峰比预想的小。

解决方法:

样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确,定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。

③ 色谱图中未出峰。

解决方法:

系统未进样或样品分解;

泵未输液或流动相使用不正确;

检测器设置不正确;

针对以上情况成因作相应调整即可。。。

④ 一个峰或几个峰是负峰。

解决方法:

流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相。

⑤ 所有峰均为负峰。

解决方法:

信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;

光学装置尚未达到平衡。

⑥ 出现双峰或肩峰。

解决方法:

进样量过大;样品浓度过高;

保护柱或色谱柱柱头堵塞;

保护拄或色谱柱污染或失效;

柱塌陷或形成短通道。

⑦ 前伸峰。

解决方法:

进样量或样品浓度高;

溶解样品的溶剂较流动。

化学先生
广州伟伯科技有限公司 版权所有 CopyRight ©2006-2023, All Rights Reserved
工信部备案号:粤ICP备08114744号   Page Run Time: 0.0030