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DPPH自由基清除率检测试剂盒

产品编号:4188199
产品类别:其他试剂盒
纯度规格:微板法
包装规格:100T
市场价:询价
优惠价:立即咨询

在生命活动的代谢过程中不断产生各种自由基,而自由基的积累会使机体产生氧化损伤而引起衰老、肿瘤、中风、心肌炎和糖尿病等慢性疾病,在众多自由基中 2,2-二苯基-1-苦基苯肼( DPPH)是一种较稳定的自由基,当有自由基清除剂存在时颜色由紫色向黄色转变,吸光度随之变小。

DPPH自由基清除率检测试剂盒(微板法)又称氮自由基清除能力检测试剂盒或氮自由基清除率检测试剂盒,其检测原理是 DPPH自由基是一种较稳定的含氮自由基,含一个单电子,溶于乙醇后溶液呈紫色,在 517nm下有强吸收,如果有其他物质提供一个电子与此单电子配对,溶液会褪色,褪色程度与接受电子的量呈正比,通过吸光度下降的程度来反应样品的氮自由基清除能力,主要用于检测血清、植物组织、抗氧化类食品、保健品及药品等样本。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成

编号名称

TO1141,100T

Storage

试剂(A):氮自由基提取液

100ml

4℃

试剂(B): DPPH溶液

50ml

4℃避光

试剂(C):维生素 C

10mg

4℃

使用说明书

1份


自备材料:

1、蒸馏水、无水乙醇

2、实验材料:植物组织(芹菜、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等

3、研钵或匀浆器或粉碎机或超声破碎机

4、离心机、离心管

5、恒温水浴锅、恒温干燥箱

6、电子天平、30~50目筛

7、酶标仪、96孔板

操作步骤(仅供参考):

1、准备样品:

①植物样品:取新鲜植物样本,清洗干净,研钵研碎(粉碎),干燥箱烘干后过筛,称取0.05g样品,加入 0.8ml氮自由基提取液,40℃水浴浸提 30~60min,10000rpm离心10min,上清液待用,4℃保存备用(亦可参考相关资料提取方法提取)。

②血浆、血清和尿液样品:血浆(用肝素或枸橼酸钠抗凝,不宜使用 EDTA抗凝) 4℃5000rpm离心 10min,取上清液待用;血清或尿液样品可直接测定。

③细胞样品:按每 5×106个细胞加入 0.8ml氮自由基提取液,超声破碎(功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30次),10000rpm离心 10min,取上清液待用。

④果汁、葡萄酒等样品:按样品:氮自由基提取液=1:9的比例震荡混匀,10000rpm离心 10min,上清液待用,4℃保存备用。

⑤高活性样品:如果样品中有效浓度较高,可用提取液进行恰当的稀释。

2、配制维生素 C溶液:将一支 10mg维生素 C充分溶解于 1ml氮自由基提取液中,即成10mg/ml维生素 C溶液;可分成 0.1ml的小份,-20℃保存。

3、配制 Vc标准工作液:如需测线性关系,建议用氮自由基提取液将 10mg/ml维生素 C溶液稀释至 20、15、10、8、6、4、2μg/ml的 Vc标准工作液;如需清除率约为 100%的阳性对照,建议选用大于 30μg/ml的 Vc标准工作液。

4、酶标仪开机预热 30min以上,调节波长 517nm(500~530nm亦可),无水乙醇调零。

5、DPPH加样:按照下表设置空白管、样本测定管、样本对照管、阳性对照管,溶液应按照顺序依次加入,混匀,室温避光静置 30min。

加入物(ml)

空白管

样本测定管

样本对照管

阳性对照管(标准管)

氮自由基提取液

0.05

上清液

0.05

0.05

Vc标准工作液

0.05

无水乙醇

0.45

DPPH溶液

0.45

0.45

0.45

6、 OD值测定:取 96孔板,将各管溶液依次吸取 300ul加至 96孔板中,用酶标仪检测各管吸光度值,依次记为 A0、A1、A2、A3。

计算:

阳性对照·DPPH清除率(%)= ( A0- A3)/A0×100%

待测样本·DPPH清除率(%)=[A0-( A1- A2)]/A0×100%

备注:

A0=空白管的吸光度值

A1=样本测定管的吸光度值

A2=样本对照管的吸光度值

A3=阳性对照管的吸光度值

注意事项:

1、正式测定之前建议选择 2~3个预期差异较大的样本做预实验。

2、实验材料应尽量新鲜,当天提取当天测定。

3、不同样本清除 DPPH自由基的能力差异很大。

4、如样本 DPPH清除率大于 90%,应用提取液稀释;如样本 DPPH清除率小于 5%,应提高样本用量以提高有效成分浓度。

5、样品中不宜添加 Triton、DTT等可能影响氧化还原反应的成分。

6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:6个月有效;4℃运输,4℃保存。

附录:

标准曲线制作:在室温条件下按说明书操作,对系列 Vc标准工作液(20、15、10、8、6、4、2、1μg/ml)进行吸光度的测定,其数值及标准曲线如下(仅供参考):


初始吸光度值

调零吸光度值

·DPPH清除率

无水乙醇

0.032



空白管

0.71

0.678


Vc标准 20μg/ml

0.075

0.043

93.65782

Vc标准 15μg/ml

0.077

0.045

93.36283

Vc标准 10μg/ml

0.108

0.076

88.79056

Vc标准 8μg/ml

0.184

0.152

77.58112

Vc标准 6μg/ml

0.35

0.318

53.09735

Vc标准 4μg/ml

0.512

0.48

29.20354

Vc标准 2μg/ml

0.669

0.637

6.047198

Vc标准 1μg/ml

0.762

0.73

-7.66962

由上图可知:Vc标准工作液在 2~8μg/ml时线性关系良好, ·DPPH清除率与 Vc浓度呈正相关,当 Vc浓度大于 10即开始有偏差,Vc浓度大于 12时, ·DPPH清除率大于 90%。

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