广州伟伯科技有限公司
您的位置:首页 > 产品中心 > DPPH 自由基清除能力试剂盒

DPPH 自由基清除能力试剂盒

产品编号:4188203
产品类别:其他试剂盒
纯度规格:微板法
包装规格:96样
市场价:630元
优惠价:立即咨询

DPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical)即 1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基。广泛用于定量测定生物试样和食品的抗氧化能力。

此法是根据 DPPH自由基有单电子,在 517nm处有一强吸收,其醇溶液呈紫色的特性。当有自由基清除剂存在时,由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失,呈现的颜色越浅,即 A值越低,进而对样本中 DPPH清除能力进行定量分析。

试剂盒的组成和配制:

试剂名称

规格

保存要求

备注

工作液

粉剂×1瓶

4℃保存

临用前甩几下使试剂落入底部,再加 19mL无水乙醇充分溶解备用;用不完的试剂 4℃避光保存;

标准品

粉剂×1支

4℃保存

若重新做标曲,则用到该试剂

所需的仪器和用品:

酶标仪、96孔板、低温离心机、可调式移液器、研钵、冰、甲醇、无水乙醇和蒸馏水。

DPPH自由基清除能力测定:

建议正式实验前选取 2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!

1、样本制备:

①组织样本:

称取约 0.1g新鲜组织或者称取约 0.05g烘干样本(将样本在 105℃下杀青 3min,然后60℃烘干至恒重,粉碎,过 40目筛,得到烘干样本),加入 1mL的 80%甲醇提取液(若鲜样需研磨均质),于 60℃,200-300W条件下超声提取 30min(间隔 5min振荡混匀一次),若有损失需用 80%甲醇定容至 1mL。12000rpm室温离心 10min,取上清测定。

【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10的比例进行提取

②细菌/细胞样本:

先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500万细菌或细胞加入 1mL80%甲醇提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30次);12000rpm室温离心 10min,取上清测定。

【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~1000:1的比例进行提取。

③液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。

2、上机检测:

①酶标仪预热 30min以上,调节波长至 517nm。

②不同样本清除能力不一,可先选取  2个样本做检测,若 A测定-A对照接近零,需对样本进行稀释(用 80%甲醇提取液稀释)后再检测,稀释倍数 D代入公式计算。

③在 EP管中依次加入:

试剂名称(μL)

测定管

对照管

空白管

样本

150

150


80%甲醇


150

150

工作液

150


150

混匀,室温(25℃)避光静置 30min;12000rpm,室温离心 5min,取 200μL至 96孔板中,于 517nm处读取吸光值 A。

【注】若一次性样本较多,可用排枪或者分批检测,以使测定管的反应时间(避光静置 30min)保持一致。

结果计算:

1、标准曲线:y =2.8486x + 0.7084;x是标准品 Trolox浓度(μg/mL),y是清除率(%)。

2、DPPH自由基清除率(%)=[(1-(A测定-A对照)÷A空白)×100]%

3、定义:用从标准曲线上获得的抗氧化剂Trolox的量来表示样本的DPPH自由基清除能力。

4、按样本质量计算:

DPPH自由基清除能力(μg Trolox/g鲜重)=[(清除率-0.7084)÷2.8486×V1]÷(V1÷V×W) ×D=0.351×(清除率-0.7084)÷W×D

举例:若清除率是 70%,则用 70代入公式计算,即:

DPPH自由基清除能力(μg Trolox/g鲜重)=[(70-0.7084)÷2.8486×V1]÷(V1÷V×W) ×D

5、按细菌/细胞计算:

DPPH自由基清除能力(μg Trolox/104 cell)=[(清除率-0.7084)÷2.8486×V1]÷(V1÷V×500) ×D=0.0007×(清除率-0.7084)÷W×D

举例:若清除率是 70%,则用 70代入公式计算,即:

DPPH自由基清除能力(μg Trolox/g鲜重)=[(70-0.7084)÷2.8486×V1]÷(V1÷V×500) ×D

6、液体样本:

DPPH自由基清除能力(μg Trolox/mL)=[(清除率-0.7084)÷2.8486×V1]÷V1×D=0.351×(清除率-0.7084) ×D

举例:若清除率是 70%,则用 70代入公式计算,即:

DPPH自由基清除能力(μg Trolox/mL)=[(70-0.7084)÷2.8486×V1]÷V1×D

V----加入提取液体积,1 mL;          V1----反应中样品体积,150μL=0.15 mL;

W----样品质量,g;                   Trolox分子量----250.29

附:标准曲线制作过程:

①制备标准品母液(0.5mg/mL):临用前加 2mL甲醇,充分溶解混匀。

②把母液用甲醇稀释成以下浓度梯度的标准品:0,5,10,15,20, 25μg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。

③按照测定管加样体系操作,依据结果即可制作标准曲线。

广州伟伯科技有限公司 版权所有 CopyRight ©2006-2023, All Rights Reserved
工信部备案号:粤ICP备08114744号   Page Run Time: 0.0608